Obtención de Las muestras para cultivo e identificación de hongos

Obtención de las muestras para cultivo e identificación de hongos

La obtención de una muestra biológica para estudio micológico depende fundamentalmente de la sintomatología o lesiones presentadas por el paciente.

Toma de muestras para piel, pelo y uñas

Las muestras biológicas de las que se recuperan con más facilidad los hongos son piel, pelo y uñas. Para la recogida de muestras de estas procedencias se procederá como sigue:· Se preparará una bandeja con alcohol etílico de 70º, guantes de un solo uso y un recipiente estéril o asépticamente limpio de boca ancha con tapón de rosca.· Dependiendo del tipo de toma a realizar se dispondrá de hojas de bisturí, corta uñas, tijeras, pinzas de depilar, cuadrados de moqueta de lana sin nylon de 4 x 5 cm envuelto en papel de poliamida y estéril, torundas con medios de transporte y jeringuillas.· Es necesario asegurarse de que antes de tomar la muestra no se ha aplicado medicación tópica alguna, por lo menos durante siete días antes.· Para obtener la muestra se desinfectará con alcohol la piel, uñas o pelos. Una vez seco el alcohol, se procederá a obtener el material de la siguiente forma:

Lesión cutánea escamosa y seca:

Raspar las escamas en la periferia de la lesión con un bisturí, recogiéndolas en un contenedor estéril o asépticamente limpio.

Lesión cutánea no escamosa:

Frotar con un trozo de moqueta la totalidad de la superficie afectada, colocándola posteriormente en su envoltorio de origen.

Espacios interdigitales:

En las micosis intertriginosas de manos y pies, deben rasparse cuidadosamente con un bisturí o cucharilla de Vidal ambos lados y base de cada espacio interdigital. Cuando existen fisuras, deben rasparse solo los lados. Además, debe tomarse siempre una muestra del cuarto espacio interdigital, ya que puede encontrase el dermatofito a pesar de no encontrar lesión alguna.

Pelos:

 Arrancar varios pelos de la lesión con ayuda de una pinza e introducirlos en un contenedor estéril, tomando aquellos pelos de apariencia frágil o que estén fragmentados. Los pelos se arrancarán para incluir en el estudio los folículos pilosos. Si existiesen costras adyacentes también se tomarán.

Uñas:

Raspar la uña con un bisturí, cortando fragmentos lesionados si es posible y depositarlos en un contenedor estéril. Cuando la afectación reside en la parte dorsal de la uña, debe rasparse la superficie externa y desechar la porción inicial, recogiendo el material de la parte subyacente.

Exudado purulento:

En caso de lesiones fisuradas con salida de exudado purulento al exterior, es preferible tomar la muestra de la parte profunda, para disminuir en lo posible la contaminación bacteriana.

Muestras respiratorias:

Las muestras respiratorias se recogerán mediante la emisión de un esputo o bien mediante un aspirado o lavado bronquial. Las muestras deben homogeneizarse y concentrarse de la misma forma que para el estudio de mico bacterias.

Toma de muestra de mucosas:

Se dispondrá de una torunda estéril de algodón y un contenedor de torunda, con o sin medio de transporte. En caso de existir lesiones blanquecinas a nivel de boca, vagina o glande, se frotará la torunda en la zona de lesión o secreción. Si el paciente solo presenta enrojecimiento, se humedecerá la torunda con unas gotas de agua o solución salina estéril y se efectuará una rotación por la superficie enrojecida. Si no existiesen evidencias de secreción y/o enrojecimiento, se procurará pasar la torunda por una zona lo suficientemente amplia como para asegurar la recuperación de la mayor cantidad posible de microorganismos.

Líquidos estériles:

Si la muestra es orina, L.C.R. o cualquier líquido estéril, se someterá a centrifugación y se sembrará el sedimento, o bien se filtrará a través de membranas especiales y se cultivará dicha membrana sobre el medio de cultivo. En el caso de los hemocultivo, seguirán el procesamiento habitual.

Recomendaciones generales para una toma de muestra

- Examinar la solicitud para constatar que ha sido cumplimentada correctamente y que contiene los datos necesarios para una inequívoca identificación del paciente. Se recomienda que la solicitud lleve adherida la etiqueta identificativa. 

- Es necesario cerciorarse, sin lugar a dudas, de que el paciente al que se le va a realizar la toma de muestra es el mismo cuyos datos figuran en la solicitud. El preguntarle su nombre, o incluso sus apellidos, puede ser insuficiente, sobre todo si éstos son comunes.

- La muestra debe quedar perfectamente identificada con la misma etiqueta de código de barras que se adhiere a la solicitud. 

- Para evitar confusiones entre muestras de pacientes no realizar más de una extracción al mismo tiempo: una vez completada la extracción o recogida de la muestra de un paciente, identificado el tubo y colocados la hoja de petición y muestra/s en la bolsa de envío, proceder a la extracción del siguiente paciente.

- Dependiendo de las determinaciones analíticas solicitadas  la  muestra  se  recogerá en diferentes tubos y contenedores

Muestra de fluidos corporales

Extracción de sangre

Es el espécimen más usado habitualmente para los estudios analíticos por la riqueza de datos que puede aportar, por su funcionalidad y por ser relativamente fácil su obtención. Dependiendo del tipo de estudio que se vaya a realizar, el tipo de muestra puede coincidir con el espécimen (sangre total) o ser una parte del mismo (plasma, suero).

Recuerde que una extracción mal realizada, o realizada en el momento equivocado, puede ser peor que no tomar ninguna muestra.

 

Extracción de otras muestras: orina, líquido Cefalorraquídeo y otros líquidos orgánicos, heces, saliva.

a) Orina

1. Se debe explicar claramente al paciente el procedimiento de recogida.

En el caso de pacientes ambulatorios la explicación debe ir acompañada de unas instrucciones claras, por escrito.

2. Utilice el contenedor adecuado a los requerimientos de la prueba solicitada y recolecte los volúmenes mínimos requeridos por el Laboratorio.

3. Si la orina no puede ser enviada  inmediatamente al laboratorio debe mantenerse refrigerada.

4. Los contenedores de orina deben enviarse al laboratorio cerrados herméticamente y con la identificación adecuada.

5. En orinas de 24 horas, no olvide anotar en el volante de petición la diuresis total

6.  En  el  caso  de  orinas  para  urocultivo  es  necesario  respetar escrupulosamente las normas de higiene durante la recogida de la orina y el manejo de los contenedores.

b) Líquido Cefalorraquídeo (LCR)

La obtención del LCR la debe realizar personal facultativo experimentado, por punción lumbar. Se recogerá en tubos estériles de tapón a rosca. Generalmente el primer tubo será para estudio bioquímico, el segundo para estudio microbiológico y el tercero para investigación de células.

c) Otros Líquidos Orgánicos (Peritoneal, Pleural, Articular, Pericardio)

La obtención la realiza personal sanitario experimentado por punción percutánea, con las debidas medidas asépticas y recogiéndose en frasco estéril.

d) Heces

Las heces deben recogerse en frascos, bien limpios, de boca ancha y cierre hermético o en los recolectores específicos destinados al efecto.  Las pruebas más frecuentemente realizadas en heces es la determinación de sangre oculta.

e) Saliva

1. Utilizar tubos de 14 x 75 mm.

2. Aspirar la saliva con pipeta Pasteur y depositar en el tubo, hasta aproximadamente un volumen de 1 mL.

Manipulación de muestras

Debe tener siempre presente que:

- Toda muestra debe considerarse como  potencialmente infecciosa

- Utilice siempre guantes cuando extraiga y maneje muestras biológicas y lávese bien las manos antes y después de su recogida.

- Para prevenir pinchazos accidentales, evite reencapuchar las agujas.

 - Conservación y transporte de la muestra


Transporte 
Los hongos se depositan durante la recolecta en canastas amplias y poco profundas (25-40 cm), las cuales deben cubrirse con un lienzo limpio de algodón o con papel encerado, los individuos se acomodan; de tal manera que los de mayor tamaño y pesados queden en la parte inferior de la canasta, con los sombreros invertidos. Cada hongo se puede envolver con papel encerado o guardar en bolsas de polipapel. 
Siempre hay que evitar el maltrato por exceso de humedad o por el contacto entre los mismos hongos. Dado que muchas especies de hongos silvestres comestibles son recolectadas en fases juveniles, esto es, antes de que liberen sus esporas, en general se extraen antes de que concluyan su esporulación, se recomienda que la recolección se lleve a cabo dejando un período al inicio de la época de fructificación y otro al final sin aprovechar el recurso; con lo que se favorece la propagación natural de las especies fúngicas. Así también se garantiza la reproducción de genotipos tanto de fructificación temprana como de fructificación tardía. Los hongos se comercializan directamente por los recolectores, quienes ofrece su mercancía a la orilla de los caminos, en mercados secundarios o bien los entregan a intermediarios y acopiadores en su comunidad a una hora determinada